因條件限制，實驗時從動物房取組織后到細胞間做實驗需15分鐘。組織是否會失去活性而導(dǎo)致類器官培養(yǎng)失?。?/div>
jie***
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2023-04-06
根據(jù)經(jīng)驗，將組織浸沒在pbs中保持4°C左右低溫，4H內(nèi)組織具有形成類器官的能力。
氣道上皮類器官類器官有哪些具體方面的應(yīng)用？
jie***
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2023-04-06
氣道上皮類器官可用于各種呼吸道疾病的研究。在science和nature期刊有許多這方面文獻。
為什么要避免類器官分化?
jie***
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2023-04-06
需要避免的并非類器官分化，而是類器官的不定向分化。若是在還需擴增時期類器官提前分化了，則類器官生長速度將大幅減慢若是分化時不按定向目標(biāo)分化，培養(yǎng)出的類器官可能并非目標(biāo)類器官。則繼續(xù)培養(yǎng)就沒了意義。這也是我們?yōu)槭裁幢仨氁x擇優(yōu)秀基質(zhì)膠。
若無可一邊培養(yǎng)類器官一邊實時觀察細胞生長情況的顯微鏡，如何確保每次觀察比對的都是同一個視野?
jie***
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2023-04-06
可以選擇一個優(yōu)秀的視野，并在該視野下用標(biāo)記筆在孔板底部做上標(biāo)記，往后觀察只需找到這個標(biāo)記調(diào)節(jié)焦距即可。
在培養(yǎng)類器官時，為什么要盡量避免類器官“貼壁”
jie***
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2023-04-06
培養(yǎng)類器官培養(yǎng)時，在基質(zhì)膠的支撐下，細胞可維持3維結(jié)構(gòu)生長。成為一個個三維結(jié)構(gòu)的細胞團，并以此模擬體內(nèi)的生長環(huán)境。此時若是類器官“貼壁”生長，則基質(zhì)膠無法良好地達成對細胞的支撐作用。而“貼壁”生長的細胞所分化形成的細胞團，不僅無法良好地模擬體內(nèi)的生長環(huán)境，同時產(chǎn)生不同的組織特性，難以重現(xiàn)器官的生理功能。
種板后為什么要倒扣培養(yǎng)板進行孵化?
jie***
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2023-04-06
在基質(zhì)膠孵育時倒扣細胞可以較好地避免細胞“貼壁”，同時若膠比較稀時細胞會因重力緣故沉底。倒扣培養(yǎng)板可使細胞不沉底避免細胞貼壁導(dǎo)致的無法形成良好的類器官結(jié)構(gòu)。翻轉(zhuǎn)過程不可用力過猛，以免基質(zhì)膠受力“貼壁”。
氣管類器官原代建立時雜細胞與氣管碎片極多，有什么方法可以將它們除去呢? 可以使用更小孔徑的濾網(wǎng)嗎?
jie***
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2023-04-06
氣管類器官原代建立時不可避免的會有許多的雜細胞和氣管碎片。若是紅細胞，種板前在細胞懸液中加入紅細胞裂解液后離心，棄上清，即可除去。而氣管碎片則在類器官傳代時便可去除。不建議用更小孔徑的濾網(wǎng)過濾細胞懸液，過小的濾網(wǎng)孔徑在阻擋雜細胞與氣管碎片時也會阻擋目標(biāo)細胞團。進行種板的細胞若是太小或是為單細胞，則類器官成活率低、生長慢。據(jù)過往實驗培養(yǎng)效果，100um為該步驟濾網(wǎng)最佳孔徑。
氣管類器官培養(yǎng)的是哪種細胞? 實驗時取用的小鼠氣管組織這么小，有足夠的成體干細胞嗎?
jie***
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2023-04-06
氣管類器官培養(yǎng)的是氣管上皮細胞，原代建立實驗收集的氣管上皮細胞比較少只能支持48孔板種板3~6孔左右。
怎么保證提出來的細胞純度及其活力呢?
jie***
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2023-04-06
氣管原代建立難以保證細胞的純度，經(jīng)過傳代后類器官的純度會增加。
腫瘤類器官實驗按步驟消化后細胞成活率大概多少？
jie***
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2023-04-06
這主要取決于目標(biāo)腫瘤組織，一般正常操作成活率達到九成以上。
